藏绵羊朊蛋白基因的原核表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈豪泰

作者： 陈豪泰;吴润;刘湘涛;谢庆阁

作者机构：

关键词： 重组朊蛋白;藏绵羊;原核表达

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2006 年 36 卷 11 期

页码： 859-863

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 从藏绵羊全血中提取基因组总DNA,用所设计的引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白(PrPc)基因。测序分析表明,所克隆的羊PrPc基因片段大小为771 bp,包含了羊朊蛋白基因的完整编码区序列,其与国内外报道的序列基本相同。将目的基因与经EcoRⅠ和XhoⅠ酶切的载体pGEX-4T-1连接后转化宿主菌BL21(DE3),挑选重组阳性菌用IPTG诱导表达,收集不同培养时间的菌液进行SDS-PAGE和Western-blotting。结果表明,PrP基因在大肠杆菌中成功表达,并能被抗牛PrPc单抗4C11识别。凝胶薄层扫描结果显示,表达蛋白约占菌体总蛋白的30%~45%,目的蛋白以包涵体的形式存在,包涵体经变性裂解、纯化和复性后得到具有一定生物学活性的目的蛋白。

分类号： S852.65

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