N9亚型禽流感病毒NA蛋白在昆虫细胞中的表达与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 衡武昌

作者： 衡武昌;崔鹏飞;张元成;邢鑫;谷文丽;颜成;孔兴天;王丛丛;彭大新;邓国华;陈化兰

作者机构：

关键词： 禽流感病毒;神经氨酸酶;N9亚型;昆虫细胞;杆状病毒

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2022 年 44 卷 007 期

页码： 777-781

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了表达具有反应原性的N9亚型禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)蛋白,本研究将DK/HuN/S11670/2015(H11N9)株NA基因克隆至杆状病毒转移载体中,构建重组转移载体pFastBacHT A-N9并经PCR和测序鉴定后转化DH10Bac感受态细胞,经PCR鉴定获得了重组杆粒rBacmid-N9,转染昆虫细胞sf21获得重组杆状病毒rBaculovirus-N9.将获得的P3代重组杆状病毒感染sf21细胞后经间接免疫荧光试验(IFA)检测N9蛋白的表达和定位,采用western blot鉴定N9蛋白的反应原性.将杆状病毒表达的重组N9蛋白包被ELISA酶标板,初步建立间接ELISA方法,利用该方法分别检测N9蛋白抗体阳性鸡血清和阴性鸡血清.IFA和western blot结果显示,N9蛋白正确表达且主要锚定在细胞膜上,表达的N9蛋白可以与鼠源N9蛋白单克隆抗体发生特异性反应.间接ELISA方法结果显示,初步建立的间接ELISA方法可以检测鸡血清中的N9抗体.上述结果表明,经杆状病毒—昆虫细胞表达的N9蛋白具有良好的反应原性,为N9AIV检测试剂盒的研发奠定了基础.

分类号： S852.65

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