日本血吸虫钙网织蛋白在Sf9昆虫细胞中的表达及其活化树突细胞的初步分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李莹

作者： 李莹;李运燕;徐瑞敏;苑纯秀;杨健美;林矫矫;李利珍;冯新港

作者机构：

关键词： 日本血吸虫;钙网织蛋白;Sf9昆虫细胞;树突状细胞

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2012 年 20 卷 04 期

页码： 45-51

摘要： 为获得在Sf9昆虫细胞中表达的日本血吸虫钙网织蛋白(Schistosoma japonicum calreticulin protein,SjCRT)并分析其活化小鼠骨髓来源树突状细胞的功能,将构建的重组杆状病毒转移载体pFastBacHTA-SjCRT转入DH10Bac细胞,得到重组穿梭质粒reBacmid-SjCRT,再转染到Sf9昆虫细胞,进行重组蛋白的表达。用Western blot和间接免疫荧光对表达蛋白进行鉴定。His柱亲和层析法纯化表达的蛋白,Westen blot鉴定纯化后的蛋白。从BALB/c小鼠产生骨髓来源的树突细胞mDCs,用纯化的重组SjCRT蛋白与mDCs共培养,流式细胞术检测mDCs细胞的表面分子MHCⅡ、CD40和CD86的表达。结果显示,在Sf9昆虫细胞中成功表达了SjCRT蛋白;纯化后的重组SjCRT蛋白既能被感染日本血吸虫42 d的兔阳性血清识别,也能被原核表达的重组SjCRT蛋白免疫鼠的血清所识别。流式细胞术结果显示,与对照组的相比,SjCRT蛋白刺激组mDCs细胞表面分子MHCⅡ和CD86的表达量显著增强(P<0.05)。可见,在Sf9昆虫细胞中表达的SjCRT蛋白能刺激小鼠骨髓来源树突细胞表型的成熟。

分类号： R383.2

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