腐败梭菌α毒素突变体可溶性表达及其对小鼠的免疫评价

文献类型： 中文期刊

第一作者： 雷伊诺

作者： 雷伊诺;赵慧玉;幸倩如;许国顺;张广智;张珊;蒋卉;沈青春;丁家波;韦英益;范学政

作者机构：

关键词： 腐败梭菌α毒素;MPEPE;毒力;可溶性;免疫原性

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2025 年 56 卷 010 期

页码： 5148-5158

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在获得可溶性、免疫原性好的腐败梭菌α毒素突变体.通过MPEPE预测工具对α毒素蛋白进行点突变预测,构建表达载体在大肠杆菌中表达验证,比较rCsa各突变体的可溶性、毒性和小鼠免疫原性.结果表明,rCsa突变体在大肠杆菌中正确表达,条带大小均为约47 ku.rCsaS398D、rCsaK405M、rCsaN397D在大肠杆菌细胞裂解上清中分别占表达总蛋白的9.5%、9.4%、10.5%,在裂解上清与沉淀中的表达量之比分别为2.5、2.6、2.9,rCsaN397D可溶性表达量最高;小鼠毒性试验结果显示3个rCsa突变体毒性均未丢失;Vero细胞毒性试验显示,0.001 6 μg·mL-1的各rCsa突变体即可引起明显的CPE;ELISA检测rCsa突变体二免21 d后小鼠血清IgG抗体水平,rCsaN397D组血清的S/N值极显著高于rCsaS398D组和rCsaK405M组(P<0.01);用Vero细胞测定rCsa突变体二免21 d鼠血清的中和效价,发现rCsaN397D二免21 d鼠血清的中和效价为6400 MLD·mL-1,极显著高于rCsaS398D和rCsaK405M组免疫血清的中和效价(P<0.0001),且高于前期试验中未突变rCsa二免21 d鼠血清的中和效价.综上,rCsaN397D在可溶性、免疫原性方面均优于未突变rCsa、rCsaS398D和rC-saK405M,可作为腐败梭菌病基因工程亚单位疫苗的候选抗原.

分类号： S852.616.3

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