鸡γ-干扰素基因在大肠杆菌中的高效表达及多克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 丁忠庆

作者： 丁忠庆;刘胜旺;孔宪刚;宋铭忻

作者机构：

关键词： 鸡IFN-γ;融合蛋白;表达;抗体制备

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2004 年 24 卷 03 期

页码： 255-257

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 将克隆得到的鸡 IFN- γ基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体 p PROEXTMHT的 Pst 和 Kpn 位点上 ,构建了重组表达质粒 p PROEXTMHT- IFN -γ,经序列分析鉴定 ,确证目的基因克隆入载体的预期位点。将重组质粒转化大肠杆菌 DH5 α,于 37℃不同时间诱导培养 ,SDS- PAGE电泳表明 ,该基因在大肠杆菌中发生高水平表达 ,表达的鸡 IFN- γ融合蛋白相对分子质量约为 2 2 0 0 0。重组蛋白占菌体总蛋白的 33%。经 Western blot鉴定 ,该重组蛋白质具有生物学活性。包涵体被 6 mol/ L 盐酸胍裂解后 ,通过镍离子亲和树脂进行了纯化。用所获得的重组鸡 IFN- γ融合蛋白及其纯化产物经 3次肌肉注射于新西兰白兔 ,制备了兔抗鸡 IFN- γ多克隆抗体。琼脂扩散结果表明 ,多克隆抗体可与纯化的鸡IFN -γ重组蛋白发生特异性反应

分类号： Q78

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