抗东方马脑炎病毒结构蛋白E2单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵晶

作者： 赵晶;孙恩成;刘霓红;杨涛;杨银辉;耿宏伟;秦永丽;王凌凤;徐青元;吴东来

作者机构：

关键词： 东方马脑炎病毒;E2蛋白;原核表达;真核表达;单克隆抗体;抗原表位

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2011 年 33 卷 11 期

页码： 893-897

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备抗东方马脑炎病毒(EEEV)结构蛋白E2的单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究以Bac-to-Bac真核表达系统表达EEEV E2蛋白,纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。以原核表达载体pET-30a表达并纯化的EEEV E2蛋白作为包被抗原建立间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,获得4株稳定分泌抗EEEV E2蛋白MAbs的杂交瘤细胞株,分别命名为6F3、6F11、7C11、8B11。Western blot与间接免疫荧光试验结果表明,获得的4株MAbs均与EEEV呈阳性反应,而与西方马脑炎病毒、乙型脑炎病毒以及登革热病毒1型～4型呈阴性反应。利用部分重叠的原核表达的短肽对E2蛋白抗原表位进行鉴定,初步确定MAb 6F11、7C11和8B11识别的抗原表位均为E-33(321EGLEYTWGNHPPKRVW336),而MAb 6F3无短肽与其反应,推测可能为构象表位。本研究结果为建立EEEV型特异性检测方法、研究E2蛋白结构功能及该病的进一步防制奠定了基础。

分类号： S852.65

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