转基因大豆多靶标质粒DNA标准分子的研制及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘奕君

作者： 刘奕君;闫伟;何禹璇;董立明;龙丽坤;李飞武

作者机构：

关键词： 转基因成分检测;转基因大豆;质粒DNA标准分子;定量

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2024 年 40 卷 011 期

页码： 169-183

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]为了确保转基因检测技术的标准化和准确性,开发一种适用于转基因大豆定性定量检测的多靶标质粒标准分子.[方法]针对 13 种转基因大豆转化体的分子特征信息,合成了含有多靶标序列的核酸片段,通过将外源片段插入pUC57 质粒多克隆位点并经大肠杆菌转化,研制了含有 27 个转基因大豆靶标序列的质粒DNA标准分子pUC57-SOY.采用普通PCR、单重、双重实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法对DNA标准分子pUC57-SOY的靶标特异性进行测试,利用 13 种大豆转化体进行定量检测适用范围和定值参数性能进行评估.[结果]在普通PCR检测中,质粒DNA包含的 24 种检测靶标,均能稳定扩增,且无非特异性扩增产物,表明质粒DNA标准分子pUC57-SOY在实际检测中具有良好的特异性;实时荧光定量PCR(qPCR)方法测试表明,质粒标准分子的不同浓度与靶标扩增效率具有良好的线性相关性.以pUC57-SOY标准分子为阳性参照物,应用标准曲线内插法,实际样品检测结果与预期相一致.[结论]开发的多靶标质粒标准分子pUC57-SOY表现出符合转基因成分定性定量检测要求的优良性能.在定性检测中,24 种检测靶标均能稳定检测出并具有良好的特异性;在定量检测中,可实现一个标准分子对应 13 种靶标的精准测定.因此,该研究创制的质粒标准分子pUC57-SOY可作为转基因大豆检测的阳性对照品.

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