甘蔗黄叶病毒CP蛋白基因ihpRNA表达载体构建及烟草转化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张雨良

作者： 张雨良;熊国如;王健华;张树珍;官梅花;杨文君;刘志昕

作者机构：

关键词： 甘蔗黄叶病毒;CP外壳蛋白;RNA干扰;ihp表达载体;烟草转化

期刊名称： 植物研究

ISSN： 1673-5102

年卷期： 2011 年 31 卷 05 期

页码： 27-32

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为提高甘蔗抗病性,本研究根据甘蔗黄叶病毒海南分离物ScYLV-CHN-HN1全基因组序列(GenBank no.HQ342888),利用病毒CP蛋白介导的RNAi技术,针对病毒外壳蛋白CP,设计两对含有酶切位点的特异性引物,CPsf1/CPsr1和CPasf1/CPasr1,以构建好的pMD19-T/CP质粒为模板,pRNAi1017为中间载体,分别合成构建干扰载体的正反向片段pRNAi-CP-F-R,将CP正反向片段分别插入表达载体pCAMBIA2300的相应位置,构建含有发卡结构的RNAi载体p2300-CP-F-R,经过PstⅠ酶切鉴定,证明载体构建成功。通过农杆菌介导的方法,以干扰表达载体p2300-CP-F-R转化烟草,经过PCR检测,得到12株阳性转基因植株,Southern blot杂交和半定量RT-PCR对其检测,证明干扰片段已经整合烟草基因组中并进行了转录,该结果为RNAi介导抗病毒甘蔗育种研究奠定基础。

分类号： S572

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