绵羊MSTN基因慢病毒表达载体的构建及其对成肌细胞的分化作用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘晨曦

作者： 刘晨曦;唐森;李文蓉;刘明军

作者机构：

关键词： 新疆细毛羊;MSTN;细胞分化;慢病毒;成肌细胞

期刊名称： 西北农林科技大学学报(自然科学版)

ISSN： 1671-9387

年卷期： 2012 年 40 卷 05 期

页码： 11-18

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】构建新疆细毛羊MSTN基因慢病毒表达载体,研究其在细毛羊成肌细胞分化中的作用,并探讨其作用机制。【方法】采用RT-PCR技术,扩增MSTN编码区序列,克隆入plex-mcs慢病毒表达载体,构建plex-MSTN慢病毒表达载体,并进行酶切及测序鉴定。将plex-MSTN包装成plex-MSTN慢病毒。用酶消化法分离培养新疆细毛羊成肌细胞,慢病毒感染制备MSTN过表达成肌细胞系,通过马血清诱导分化,Western blotting检测分化细胞MSTN基因的表达,免疫荧光分析分化肌管的融合率及肌管直径,Realtime RT-PCR检测分化相关基因的表达。【结果】克隆的新疆细毛羊MSTN基因编码区全长序列(1 128bp)与NCBI上公布的序列99.9%同源,仅在外显子2上存在单碱基突变;Western blotting检测结果显示,MSTN过表达成肌细胞过表达MSTN蛋白;免疫荧光检测表明,MSTN过表达成肌细胞的肌管融合率与肌管直径分别为5.69%和12.35μm,显著低于非转化成肌细胞(10.21%和18.5μm)(P<0.05);Re-altime RT-PCR结果显示,MSTN过表达成肌细胞中的Myogenin、p21、MyoD基因表达显著下调,Smad3基因表达极显著上调(P<0.01)。【结论】成功构建了细毛羊MSTN基因慢病毒表达载体,MSTN基因对细毛羊成肌细胞的分化具有显著的抑制作用,确定了MSTN基因与Myogenin、p21、MyoD及Smad3基因在成肌细胞分化过程中的调控关系。

分类号： Q782`S826

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