裂谷热病毒NP蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 郭瑶

作者： 郭瑶;单逢缘;陆阳;陶丽红;王欣慧;蒋永伦;步志高;钟功勋

作者机构：

关键词： 裂谷热病毒;核蛋白;双抗体夹心ELISA

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2024 年 46 卷 010 期

页码： 1043-1048,1056

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立裂谷热病毒（RVFV）的快速检测方法，本研究选取RVFV高度保守的核蛋白（NP）基因，采用哺乳动物真核表达系统表达并纯化重组NP蛋白（r NP），经SDS-PAGE检测无误后将其分别免疫小鼠和大白兔，按常规实验方法制备RVFV鼠源NP单克隆抗体（MAb）5D8和兔源NP多克隆抗体（PAb）rab NP-1，经ELISA检测二者效价均为1:51 200。以rab NP-1 PAb作为捕获抗体，5D8 MAb经HRP标记后作为检测抗体，经条件优化后结果显示，该检测方法捕获抗体浓度为1.56 mg/mL,0.2μg/孔；检测抗体浓度为1.17 mg/mL,2.24 ng/孔，初步建立RVFV双抗体夹心ELISA抗原检测方法。利用该方法分别对克里米亚-刚果出血热病毒（CCHFV）、拉沙病毒（LSV）、新冠病毒（SARS-CoV-2）和RVFV的NP以及RVFV Gn蛋白样品进行检测，结果显示，仅RVFV NP蛋白检测结果呈阳性，其余几种病毒蛋白均为阴性，无交叉反应；利用该方法检测2倍倍比稀释（21～216）的RVFV复制缺陷型灭活病毒样品，结果显示经214倍稀释后的RVFV检测结果仍为阳性，该方法对RVFV检测限为6.1×10-1FFU/mL；利用同一批次和不同批次包被的ELISA板进行批内和批间重复性检测，结果显示批内和批间变异系数均小于8%。使用RVFV灭活病毒对建立的双抗体夹心ELISA检测方法进行验证，结果符合预期。本研究建立的RVFV双抗体夹心ELISA检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好，可用于RVFV的快速检测，也可为NP蛋白功能的研究提供技术支撑。

分类号： S852.65

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