ETEC F4-F5融合基因表达及间接ELISA方法建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张强

作者： 张强;张雪寒;何孔旺;王春凤

作者机构：

关键词： 产肠毒索性大肠杆菌;F4菌毛;F5菌毛;间接酶联免疫吸附试验

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2016 年 36 卷 08 期

页码： 1312-1317

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 表达产肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)黏附素F4和F5融合蛋白,建立间接ELISA方法,旨在监测猪场ETEC感染以及疫苗免疫情况。根据GenBank中登录F4和F5基因序列,分析保守区,优化密码子,合成F4-F5串联基因,克隆入原核表达载体,表达重组蛋白His-F4-F5。以纯化的His-F4-F5蛋白作为检测抗原,建立检测ETEC抗体的间接EIISA方法。经酶切和DNA序列分析,成功构建重组菌BL21(pCold I-F4-F5),SDS-PAGE和Western blot分析,融合表达F4-F5相对分子质量为29 000,与ETEC高免血清发生特异性反应,条带单一。经优化筛选的间接ELISA最佳反应条件:抗原包被浓度6ng/孔,待检血清稀释比例1∶200,HRP-羊抗猪二抗的工作浓度1∶15 000,5%脱脂奶封闭l h,底物作用时间15min。本研究建立F4-F5间接ELISA方法具有特异性好、敏感性高、重复性好、稳定性强的特点,是猪场ETEC感染和疫苗免疫效果检测的有效工具,进而指导疫苗使用和新型疫苗研发。

分类号： S852.61

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