正交设计优化大豆SSR-PCR反应体系及引物筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 苏辉

作者： 苏辉;李志刚;宋书宏

作者机构：

关键词： 大豆;SSR-PCR;正交设计;体系优化;引物筛选

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2009 年 24 卷 02 期

页码： 103-106

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以大豆(Glycine maxL.)为材料,研究了PCR反应体系的主要成分对大豆SSR扩增结果的影响,并确定影响SSR扩增结果的各因素的最佳用量。以CTAB法提取的大豆叶片DNA为模板,应用L16(44)正交设计对影响大豆SSR-PCR的主要参数进行优化,建立适合大豆SSR-PCR反应的最佳体系。结果表明:各因素不同水平浓度对PCR反应结果均有显著影响。大豆SSR-PCR优化反应体系为:2.0μL10×PCRBuffer,30 ng模板DNA,150μmol/LdNTP,0.4μmol/LSSR引物,1.5 UTaqDNA聚合酶,2.0 mmol/L Mg2+,加ddH2O至终体积20.0μL。优化的PCR扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性30 s,50℃退火1 min,72℃延伸1 min,共35个循环,72℃延伸5 min,4℃保存。同时选用200对大豆引物对2份材料进行扩增,筛选出条带清晰,多态性好的引物74对,用于大豆SSR标记的进一步研究。

分类号： S565.1

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