赤羽病病毒核衣壳蛋白基因的表达纯化及活性鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李少英

作者： 李少英;冉多良;孟庆文;吴东来

作者机构：

关键词： 赤羽病病毒;核衣壳蛋白;表达;纯化

期刊名称： 中国兽医科技

ISSN： 1000-6419

年卷期： 2005 年 35 卷 12 期

页码： 937-941

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为获得赤羽病病毒(Akabane virus,AKAV)核衣壳蛋白重组抗原,经RT-PCR扩增了OBE-1株的S节段,将其插入到pMD 18-T载体,然后用带有酶切位点的引物从该重组载体亚克隆出表达核衣壳蛋白的N基因,用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后与同样处理的表达载体pET-28a(+)进行连接,转化感受态细胞BL21(DE3)。将筛选出的阳性克隆进行测序、IPTG诱导表达和融合蛋白纯化及活性鉴定。结果表明,N基因含有1个全长702 bp的ORF,编码233个氨基酸,通过SDS-PAGE和Western-blotting分析,证实重组菌株可高效表达有免疫活性的分子质量约27 ku的可溶性融合蛋白,用薄层扫描仪分析,其最高表达量占可溶性菌体蛋白总量的58.5%。工程菌经超声波裂解高速离心后,上清液在ProBondTMPurification System(含Ni2+)天然状态下纯化,可获得高纯度的融合蛋白。

分类号： S852.659.5

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