内皮特异性表达人血栓调节蛋白的载体构建及体外表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 宋小凤

作者： 宋小凤;石宁宁;冯冲;魏静;周艳荣;陈红星;潘登科

作者机构： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与种质创新重点实验室;军事医学科学院生物工程研究所

关键词： 血栓调节蛋白(TBM);血管内皮;特异性表达;凝血失调;猪

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2015 年 23 卷 12 期

页码： 1597-1603

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 血栓调节蛋白(thrombomodulin,TBM)是血管内皮细胞表达的一种膜蛋白,在凝血过程中起到关键作用。已有研究表明,异种移植时由于分子不匹配造成猪(Sus scrofa)TBM不能有效地调节凝血而形成血栓,而在猪的血管内皮细胞表达人TBM可能有助于调节凝血。本研究利用猪源TBM启动子调控人(Homo sapiens)TBM基因(Human thrombomodulin,h TBM),采用基因抓捕的方法获得了7和9 kb猪血栓调节蛋白(Pig thrombomodulin,p TBM)启动子,构建两种表达h TBM的载体,命名为p7K(p TBM)-h TBM和p9K(p TBM)-h TBM。体外转染猪内皮细胞、耳成纤维细胞及肾细胞,通过RT-PCR、q RT-PCR和Western blot检测其特异性表达。RT-PCR显示,7和9 kb两种启动子都能特异调控h TBM在血管内皮表达;q RT-PCR和Western blot显示,9 kb启动子的启动活性高于7 kb(P<0.05)。本研究表明,9 kb p TBM启动子能够驱动h TBM在血管内皮特异性高效表达,为创建血管内皮特异高表达人抗凝血因子的转基因猪提供了基础资料,有助于克服异种移植分子不匹配出现的凝血失调。

分类号： Q78

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