猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的遗传变异及其原核表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈建飞

作者： 陈建飞;冯力;时洪艳;孙东波;白兴华;佟有恩

作者机构：

关键词： 猪流行性腹泻病毒;N蛋白基因;序列同源性;重组蛋白;免疫学活性

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2007 年 29 卷 11 期

页码： 856-860+895

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777、Chinju99、JS-2004-2和LJB/03N蛋白基因ORF的序列同源性分别为97.1%、96.8%、96.7%和96.5%;推导的氨基酸序列的同源性分别为97.7%、97.1%、97.1%和96.8%。以阳性质粒为模板,用分别含有BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增得到ORF,其PCR产物经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到pET-30a载体,构建的重组质粒命名为pET-30a-PN;将pET-30a-PN转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达;SDS-PAGE结果表明表达出与预期大小相符的约54.4Ku的重组蛋白,重组蛋白以包涵体形式存在;薄层扫描结果表明表达产物占菌体总蛋白的30.5%;Western blot分析表明表达的重组蛋白能与抗PEDV高免血清反应,说明该重组蛋白具有免疫学活性。

分类号： S852.65

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