呼吸道合胞病毒mRNA候选疫苗的表达、鉴定及免疫效果验证
文献类型: 中文期刊
第一作者: 姜人月
作者: 姜人月;庄忻雨;田明尧;唐家凤;狄亚心;杨松惠;许智强;于潼;张桐;金鑫;金宁一
作者机构:
关键词: 呼吸道合胞病毒;mRNA疫苗;密码子优化;体液免疫
期刊名称: 中国病原生物学杂志
ISSN: 1673-5234
年卷期: 2024 年 005 期
页码: 497-501
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 目的 制备呼吸道合胞病毒F蛋白的融合前构象(pre-F)mRNA疫苗,进行可行性验证。方法 对抗原基因进行密码子优化设计,分别连接至pGEM-3Zf-N3载体上,通过质粒线性化、体外转录、纯化和Cap1加帽处理,得到功能性mRNAs。在转染至293T细胞后,利用Western blot和间接免疫荧光试(IFA)来确定目标蛋白的表达情况。通过微流控装置制备LNP/mRNAs疫苗免疫C57BL/6小鼠,检测小鼠血清中抗原特异性IgG抗体效价,评估免疫效果。结果 成功构建重组质粒Pre-F-GCN4t和mDS-Cav1,通过双酶切验证条带符合预期大小。表达目的抗原大小为57.57 ku和64.35 ku。成功检测小鼠血清中抗原特异性IgG抗体,Pre-F-GCN4t免疫组的效果优于mDS-Cav1组,3次免疫较2次免疫提升了2倍,抗体效价最高可达1∶4×10~4。结论 两种抗原设计模式均具有可行性,Pre-F-GCN4t的设计方式对于激活机体的体液免疫应答更有优势,mRNA疫苗无需体内转录,为呼吸道合胞病毒mRNA疫苗的优化设计提供理论基础。
分类号: R392-33
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