文献类型: 中文期刊
第一作者: 郭俣
作者: 郭俣;刘长青;陆涛峰;包阿东;刘帅;关伟军;马月辉
作者机构:
关键词: 北京油鸡;purH基因;荧光蛋白;成纤维细胞;基因表达
期刊名称: 激光生物学报
ISSN: 1007-7146
年卷期: 2010 年 19 卷 03 期
页码: 59-66
收录情况: CSCD
摘要: 提取北京油鸡8种组织的总RNA,利用RT-PCR检测purH基因mRNA的差异表达。将purH基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-N3,构建带有GFP报告基因重组表达载体pEGFP-purH,利用脂质体介导法将其导入北京油鸡体外培养细胞中,进行G418药物筛选和克隆化培养。结果表明:北京油鸡purH基因(GenBank登录号:EU334506)编码区为1782 bp,编码593 aa的多肽,转染后24 h、48 h和72 h,pEGFP-purH转染率在10.3%~53.2%之间,绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中,随表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状。经药物筛选和克隆化培养,获得表达pEGFp-purH融合蛋白的克隆细胞株,RT-PCR与Western blotting检测确认pEGFP-purH已整合到北京油鸡成纤维细胞基因组中,在优化的条件下,阳性细胞凋亡率、生长与增殖状况与对照组比较差异不显著(P>0.05)。
分类号: S831`Q78
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