鸡高迁移率蛋白1双抗体夹心ELISA方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 曲昱蓉

作者： 曲昱蓉;詹媛;仇旭升;丁铲

作者机构：

关键词： 鸡HMGB1蛋白;单克隆抗体;多克隆抗体;双抗体夹心ELISA

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2018 年 02 期

页码： 117-121

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立鸡高迁移率族蛋白1(chHMGB1)蛋白酶联免疫定量分析方法,本研究原核表达重组ch HMGB1蛋白(rchHMGB1)。以纯化的rchHMGB1作为免疫原分别免疫BABL/c小鼠和新西兰大白兔以分别制备针对rchHMGB1的鼠单克隆抗体(MAb)和兔多克隆抗体(PAb),并对兔PAb进行辣根过氧化物酶(HRP)标记。以鼠抗rchHMGB1 MAb做为包被抗体,HRP标记兔PAb为检测抗体,建立了定量测定rchHMGB1的双抗体夹心ELISA方法。对该方法进行了特异性、检测限和稳定性等试验。结果显示,包被抗体和检测抗体的最佳工作浓度均为1∶500稀释,抗原浓度在72.5 ng/mL~75μg/mL范围内呈良好线性关系,相关系数R2>0.99。该方法可以特异性检测rchHMGB1,最低检测限为36.25 ng/mL,连续6 d检测抗原绘制的标准曲线稳定性良好。本实验建立的rchHMGB1双抗体夹心ELISA方法,灵敏度较高,重复性好,为进一步研究chHMGB1在疾病感染过程中发挥的病理学机制奠定基础。

分类号： S852.4

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