CRISPR/Cas9体外酶切检测猪生长抑素基因定点修饰靶点活性的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李晓敏

作者： 李晓敏;任红艳;毕延震;刘西梅;郑新民

作者机构：

关键词： 猪;生长抑素基因;Cas9酶;单链导向RNA(sgRNA);体外转录

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2016 年 43 卷 01 期

页码： 31-38

收录情况： 北大核心

摘要： 本试验旨在通过CRISPR/Cas9体外酶切法检测猪生长抑素(SST)基因定点修饰靶点的活性。试验设计5个长20bp的单链导向RNA(sgRNA),即SST-sgRNA-g1、SST-sgRNA-g2、SST-sgRNA-g3、SST-sgRNA-g4和SST-sgRNA-g5。化学合成sgRNA寡核苷酸序列,将寡核苷酸序列连接到可同时表达Cas9和sgRNA的质粒中,挑选正确克隆的质粒作为模板进行体外转录形成SST-sgRNA。利用CRISPR/Cas9体外酶切含靶点的DNA片段,根据酶切条带的灰度换算成sgRNA活性。结果显示目的sgRNA寡核苷酸双链成功插入到质粒中且序列正确,以质粒为模板体外转录SST-sgRNA成功。靶位点经Cas9蛋白酶切后与标准sgRNA1和sgRNA2酶切活性作比较,确定靶点SST-sgRNA-g1、SST-sgRNA-g4和SST-sgRNA-g5活性较高,可为在细胞水平、胚胎水平做基因定点修饰提供依据。

分类号： Q78

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