环形泰勒虫感染细胞抑制性消减文库的构建及ESTs分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵洪喜

作者： 赵洪喜;刘军龙;李有全;杨聪山;赵帅阳;刘娟;刘爱红;谢俊仁;田占成;刘志杰;刘光远;殷宏;关贵全;罗建勋

作者机构：

关键词： 环形泰勒虫;抑制性消减杂交;ESTs

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2015 年 48 卷 22 期

页码： 4551-4563

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】环形泰勒虫(Theileria annulata)可以感染牛B淋巴细胞、树突状细胞和巨噬细胞,并可使被感染细胞发生转化,体外培养时可获得类似肿瘤样细胞的无限增殖能力。本研究通过构建环形泰勒虫转化和非转化宿主细胞抑制性消减文库,筛选环形泰勒虫裂殖体基因及转化细胞与宿主正常细胞之间的差异表达基因。【方法】以环形泰勒虫裂殖体转化细胞和非感染牛外周血单个核细胞(即非转化宿主细胞)为试验材料,提取总RNA和m RNA,反转录合成c DNA;然后分别作为tester和driver,进行抑制性消减杂交(SSH),构建环形泰勒虫转化和非转化宿主细胞抑制性消减文库;对随机挑取的阳性克隆进行测序及生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR对文库部分差异基因进行验证。【结果】通过对文库454个阳性克隆进行测序,共获得了有效表达序列标签(ESTs)364条,大小主要分布在350—1 200 bp之间;将这些ESTs序列在Gen Bank中进行BLASTn网上序列比对,其匹配于192条基因序列;其中包括环形泰勒虫序列60条(11条为虫体蛋白酶基因序列、10条为膜蛋白基因序列、7条为假设蛋白基因序列、5条为凋亡相关虫体蛋白基因序列、5条为核糖体蛋白基因序列、4条为细胞周期蛋白基因序列、4条为虫体抗原基因序列和虫体其它基因序列14条)、牛基因序列131条(其中19条为肿瘤相关蛋白基因序列)和1条未知序列;其中已有功能注释的ESTs 285条,再将已知功能的ESTs通过WEGO软件从生物学过程(biological process)、细胞组成(cellular component)和分子功能(molecular function)3个部分进行GO聚类分析,结果表明,宿主细胞差异基因主要集中在细胞、细胞进程、结合、催化、代谢进程、生物调节等功能方面。另外,通过对部分环形泰勒虫裂殖体转化宿主细胞差异基因进行荧光定量PCR分析,结果表明,肿瘤相关基因HCLS1和SENP5在转化宿主细胞中转录水平分别是非感染牛PBMCs(非转化宿主细胞)的2.06和1.32倍。【结论】利用SSH技术,成功构建了环形泰勒虫感染宿主细胞的抑制性消减文库,筛选获得了转化宿主细胞和环形泰勒虫裂殖体的表达基因,并通过荧光定量PCR分析获得了2个可能参与宿主细胞转化的基因,为进步探索环形泰勒虫与宿主细胞相互作用的分子机制奠定了基础。

分类号： S852.7

  • 相关文献

[1]日本血吸虫7d童虫消减cDNA文库的构建及测序分析. 王欣之,矫矫,石耀军,冯新港,苑纯秀,金亚美. 2008

[2]大白菜花蕾败育相关基因的cDNA-AFLP差异表达分析. 张鲁刚,贾晋,张少丽,张玉. 2010

[3]猪骨和皮脂性状相关ESTs的SNPs筛查与关联分析. 覃立立,蔡更元,张豪,陈瑶生,李加琪,王翀. 2011

[4]茶树叶片ESTs序列及其功能基因表达谱特征分析. 赵丽萍,陈亮,高其康. 2004

[5]油菜对菌核病和黑胫病的抗病机制分析. 刘胜毅,毛晗,苏震,董彩华,徐文英,冀瑞琴,郭学兰. 2005

[6]西瓜EST资源的SSR信息分析及标记开发. 赵胜杰,刘文革,阎志红,何楠,包文风. 2009

[7]东方山羊豆盐诱导抑制差减杂交文库构建及其表达序列标签分析. 宋清晓,王学敏,高洪文,Dzyubenko Nikolay,Chapurin Vladimir,韩永增,杨冬梅,李玉坤. 2010

[8]茶树新梢cDNA克隆测序和表达序列标签(ESTs)特性分析. 陈亮,赵丽萍,高其康. 2005

[9]油菜抗病相关ESTs和抗病机制的初步分析. 刘胜毅,毛晗,苏震,董彩华,徐文英,冀瑞琴,郭学兰. 2005

[10]14549个甘蓝型油菜UniqueESTs分析和抗病相关特征基因(英文). 刘胜毅,毛晗,董彩华,冀瑞琴,郭学兰,刘越英. 2007

[11]小麦种质N9436抗白粉病的特异基因表达谱分析. 吴金华,胡银岗,张宏,王长有,王秋英,吉万全. 2008

[12]高产紫杉醇菌株的诱变选育及其差异表达基因消减cDNA文库的构建. 赵凯,孙立新,王旋,李秀凉,王歆,周东坡. 2011

[13]穿山龙薯蓣皂甙次生代谢合成相关新基因的克隆和分析. 苟兴华,何明雄,孙雁霞,王跃华,苟小军. 2010

[14]花椰菜抗黑腐病消减cDNA文库的构建和分析. 江汉民,郝擘,于雪梅,李爱,王春国. 2010

[15]发情期湖羊卵巢组织差异表达基因的筛选与分析. 陈磊,李雯雯,李大全. 2018

[16]内蒙古成年绒山羊皮肤特异基因表达的研究. 刘羿羿,尹俊,张燕军,李荣,刘志红,席海燕,张俊霞,李金泉,李玉荣. 2006

[17]两个苹果乙烯反应因子MdAP2D4与MdAP2D19的序列分析及原核表达. 田义,陈可钦,安秀红,郝红梅,刘志,丛佩华,郝玉金. 2013

[18]辣椒Me3基因介导抗根结线虫相关基因的SSH分析. 茆振川,谢丙炎,杨宇红,冯东昕,冯兰香,杨之为. 2007

[19]家蚕耐氟近等基因系SSH文库的构建及部分差异表达基因的分析. 王小强,徐安英,李刚,张月华,钱荷英,孙平江,郭锡杰. 2011

[20]不同含油量大豆成熟期胚抑制消减cDNA文库构建及其差异表达基因分析. 程金朋,陈波,徐有明,周新安,卢长明,魏文辉. 2007

作者其他论文 更多>>

微信小程序