北京油鸡ADSL基因的克隆、表达及其结构与功能分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘长青

作者： 刘长青;刘帅;包阿东;陆涛峰;吴宏梅;张洪海;唐学玺;关伟军;马月辉

作者机构：

关键词： 北京油鸡;腺苷酸琥珀酸裂解酶;结构分析;基因表达

期刊名称： 动物学研究

ISSN： 0254-5853

年卷期： 2008 年 29 卷 04 期

页码： 353-362

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用RT-PCR与RACE方法扩增出北京油鸡腺苷酸琥珀酸裂解酶(ADSL)基因全长cDNA序列,亚克隆和序列分析结果表明:该基因开放阅读框长为1455个碱基,编码485个氨基酸;5′端非转录调控区具有典型管家基因的特征,在临近起始密码子-27号碱基发生C→T突变,该突变使得本来不是核呼吸因子2(NRF-2)结合位点的CTCC突变为NRF-2结合位点CTTC。将ADSL基因完整开放阅读框重组至融合表达载体pGEX-4T-1中,构建成北京油鸡ADSL基因融合表达载体pGEX-ADSL,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性克隆,IPTG诱导表达。经SDS-PAGE电泳显示重组融合蛋白在约80.5kD处有特异蛋白条带出现,与预期分子量大小一致,等电点为6.79。该蛋白的表达量随诱导时间的延长而增加,5h达最高值,达到细胞总蛋白的26.9%,且主要以不可溶的包涵体形式存在,经优化表达条件,成功地获得了可溶性的融合蛋白,经Glutathione Sepharase4B凝胶纯化后Western blotting检测表明其为北京油鸡ADSL蛋白,为其进一步的生物学功能及其应用研究鉴定基础。

分类号： S831

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