祖先序列重建增强D-阿洛酮糖3-差向异构酶的热稳定性
文献类型: 中文期刊
第一作者: 管立军
作者: 管立军;朱玲;王崑仑;李家磊;高扬;严松;张馨笛;陈晴;季妮娜;李波
作者机构:
关键词: 祖先序列重建;D-阿洛酮糖;D-阿洛酮糖3-差向异构酶;热稳定性
期刊名称: 食品工业科技
ISSN: 1002-0306
年卷期: 2024 年 45 卷 021 期
页码: 121-128
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 为解决现有D-阿洛酮糖3-差向异构酶(DAEase)热稳定性差的产业问题,本文采用系统发育指导的大数据挖掘、合理修饰和祖先序列重建策略(ASR),重建了具有不同催化结构域DAEase的祖先序列,构建了表达载体,通过重组表达与分子对接筛选出了DAEase A13并进行酶学性质表征,此外,还基于结构分析与分子动力学模拟揭示了DAEase A13热稳定性增强的分子机制。结果表明,基于ASR策略所构建的A13 70℃时半衰期可达8.4 h,其热稳定性较野生(WT)酶显著增强,最大转化率为31%,催化活性也略高于WT酶。立体结构模拟与分子动力学模拟揭示了ASR A13中大量氢键和疏水作用的增加维持了高温下酶分子结构的稳定性,是其热稳定性增强的主要因素。研究结果证实了ASR策略可以改造DAEase使其稳定性、活性和混杂性增强,可以为D-阿洛酮糖工业生产提供良好的生物催化剂。
分类号: TS201.25
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