一种PCR产物克隆零背景T载体的构建
文献类型: 中文期刊
第一作者: 吕新
作者: 吕新;陈丽华;方志鹏;李晓琳;李玥仁
作者机构:
关键词: PCR产物克隆;零背景;T载体
期刊名称: 福建农业学报
ISSN: 1008-0384
年卷期: 2017 年 32 卷 03 期
页码: 312-316
收录情况: 北大核心
摘要: 为解决平末端加T法构建的T载体,在PCR产物克隆时连接效率低、阳性克隆筛选困难的问题,本研究在利用Taq DNA聚合酶末端转移酶活性对线性化平末端pBluescript SK(+)载体3′-端进行加T反应后,使用T4DNA连接酶处理加T后pBS载体,使3′-端未加T平末端载体重新形成超螺旋状态,而3′-端加T载体则保持线性化状态,在琼脂糖电泳时切胶回收3 000bp处DNA片段,成为pBS-T载体。使用构建的pBS-T载体分别克隆500bp和1 000bp PCR片段,pBS-T载体克隆效率达到100%,实现了对PCR产物的零背景克隆。
分类号: R346
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[1]简易快速高效制备T载体. 武晓丽. 2008
[2]一种基于核酸外切酶Ⅲ的PCR产物克隆方法. 王艳艳,张春雨,王兴春,刘斌. 2014
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