文献类型： 中文期刊
第一作者： 张美超
作者： 张美超;曹雅男;姚斌;周志刚
作者机构：
关键词： 高丝氨酸内酯酶;木聚糖酶;融合表达;酶学性质
期刊名称： 微生物学报
ISSN： 0001-6209
年卷期： 2011 年 51 卷 08 期
页码： 1052-1061
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 【目的】构建N-乙酰高丝氨酸内酯酶-木聚糖酶双酶活性表达毕氏酵母重组菌株,并对经纯化的重组蛋白SL2B进行N-乙酰高丝氨酸内酯酶及木聚糖酶酶学性质的研究。【方法】利用PCR拼接技术得到N-乙酰高丝氨酸内酯酶基因aiiA-B546和木聚糖酶基因xynAS27cd融合而成的基因Sl2b。构建重组表达载体pPIC9/Sl2b转化毕氏酵母,筛选得到同时具有木聚糖酶和N-乙酰高丝氨酸内酯酶活性的重组子,随后对经硫酸铵沉淀、分子筛纯化后得到的重组蛋白SL2B进行N-乙酰高丝氨酸内酯酶及木聚糖酶酶学性质的研究。【结果】筛选得到N-乙酰高丝氨酸内酯酶和木聚糖酶均可高效表达活性的毕氏酵母重组菌株。纯化后的融合蛋白中N-乙酰高丝氨酸内酯酶的最适作用pH为8.0,作用温度为30℃,在pH 6-11的范围内能够稳定的存在,在0℃-50℃之间,酶活性能够维持在80%以上,且该酶对多种金属离子、化合物和中性蛋白酶都具有很好的抗性。该融合蛋白对多种底物都具有一定的降解作用,以3-oxo-C8-HSL为底物时的Km值为0.05 mmol/L。木聚糖酶的最适pH为6.5,最适作用温度为60℃,在pH 6-8的范围内能够稳定的存在,在50℃-65℃之间,酶活性能够维持在80%以上,且该酶对多种金属离子、化合物和中性蛋白酶都具有很好的抗性,以燕麦木聚糖为底物时的Km值为2.9 mg/L。在30℃、中性条件下融合蛋白对动物(鱼)肠道环境具有很好的抗性。【结论】本实验选取的木聚糖酶基因具有一个强启动子,可高效表达,通过融合表达的方式带动N-乙酰高丝氨酸内酯酶的高效表达;木聚糖酶具有易检测的优点,通过融合表达简便N-乙酰高丝氨酸内酯酶的活性检测;同时构建的融合蛋白SL2B中木聚糖酶及N-乙酰高丝氨酸内酯酶性质与单酶相比不受影响,在控制外源性病原菌毒性效应及缓解饲源性抗营养因子危害、维护畜禽(水产)消化道健康方面具有一定的应用前景。
分类号： TQ925
- 相关文献
[1]高效表达N-乙酰高丝氨酸内酯酶-木聚糖酶融合蛋白及其酶学性质的研究. 张美超,周志刚,曹雅男,何夙旭,刘玉春,姚斌. 2010
[2]果胶裂解酶、木聚糖酶融合蛋白在毕赤酵母中的高效表达及其活性鉴定. 王智,顿宝庆,路明. 2013
[3]米根霉糖化酶、类芽孢杆菌木聚糖酶融合蛋白的真核分泌表达. 王智,宋立立,顾金刚,顿宝庆,田谷,路明,李桂英. 2011
[4]糖化酶、木聚糖酶融合蛋白在毕赤酵母中的高效表达. 王智,顿宝庆,顾金刚,赵萱,田谷,路明,李桂英. 2012
[5]β-甘露聚糖酶Man5A和木聚糖酶Tlxyn11B的融合表达. 孔海洋,蒋肖,王苑,黄火清,罗会颖. 2020
[6]生长抑素和耐热木聚糖酶的融合表达及性质研究. 黄坤龙,苏小运,姚斌. 2020
[7]欧文氏杆菌变异菌株木聚糖酶纯化及其酶学性质. 徐君飞,刘正初,张居作,陈汉忠,段盛文,郑科,冯湘沅,成莉凤. 2009
[8]固载化木聚糖酶交联酶聚集体的制备及性质. 王冬伟,孙谧. 2016
[9]来源于瓶霉Phialophora sp. G5的酸性木聚糖酶基因的克隆及性质的研究. 张帆,石鹏君,缪礼鸿,姚斌. 2011
[10]来源于瓶霉Phialophorasp.G5的酸性木聚糖酶基因的克隆及性质的研究. 张帆,石鹏君,缪礼鸿,姚斌. 2011
[11]瓶霉Phialophorasp.P13木聚糖酶基因的克隆及酶学性质分析. 程菲菲,赵军旗,石鹏君,李江,姚斌. 2012
[12]瓶霉Phialophora sp.P13木聚糖酶基因的克隆及酶学性质分析. 程菲菲,赵军旗,石鹏君,李江,姚斌. 2012
[13]脂环酸芽孢杆菌Alicyclobacillus sp. A15木聚糖酶基因xynA15的克隆表达及性质研究. 王建设,柏映国,尹俊,姚斌. 2010
[14]嗜热脂肪芽孢杆菌木聚糖酶A的H297F定点突变、表达及酶学性质变化. 李婵娟,石慧,王曼玥,王婧. 2018
[15]粗糙脉孢菌木聚糖酶酶学性质的研究. 赵亮亮,李燕荣,梁鲜菊,谌斌. 2009
[16]脂环酸芽孢杆菌Alicyclobacillussp.A15木聚糖酶基因xynA15的克隆表达及性质研究. 王建设,柏映国,尹俊,姚斌. 2010
[17]1株产木聚糖酶菌株的鉴定、产酶条件的优化及酶学性质初探. 姚健,陈庆隆,张诚,钟国祥,王洪秀,马吉平. 2017
[18]来源于盐惰菌属Halopiger xanaduensis的木聚糖酶基因在毕赤酵母中诱导表达及其酶学性质的研究. 于成野,韩红娟,付晓燕,游双红,孙淼,朱恒文,彭日荷,姚泉洪. 2017
[19]特异腐质酶Humicola insolens Y1耐热型木聚糖酶基因的克隆及酶学性质分析. 李雅楠,余利红,李昀楷,马文康,张伟. 2013
[20]特异腐质酶HumicolainsolensY1耐热型木聚糖酶基因的克隆及酶学性质分析. 李雅楠,余利红,李昀楷,马文康,张伟. 2013
作者其他论文 更多>>
-
饲用氨基酸的生物合成与产业化应用
作者：姚斌;徐欣欣;张杰;罗会颖
关键词：低蛋白质饲粮;氨基酸;生物制造;合成途径;菌株改良
-
来源于异形曲霉的葡萄糖氧化酶催化活性和热稳定性改良
作者：余尚霖;周乔;张宏海;柏映国;罗会颖;杨小军;姚斌
关键词：葡萄糖氧化酶;定向进化;理性设计;催化活性;热稳定性
-
优化sgRNA提高塔宾曲霉基因编辑效率
作者：梁丽存;王克芬;宋祖洹;刘梦婷;李佳玉;罗会颖;姚斌;杨浩萌
关键词：塔宾曲霉;基因编辑效率;启动子;“lock”结构
-
化学试剂对塔宾曲霉同源重组效率的影响
作者：梁丽存;刘文龙;刘晓青;姚斌;黄火清;杨浩萌
关键词：化学试剂;同源重组效率;塔宾曲霉
-
数字技术在水产养殖中的应用进展与展望
作者：梁晨;张华;周志刚;陈楠;暴愿达
关键词：数字技术;水产养殖;应用进展;展望;人工智能
-
提高丝状真菌精准基因编辑效率的策略
作者：杨浩萌;梁丽存;宋祖洹;徐欣欣;罗会颖;姚斌;黄火清
关键词：CRISPR/Cas;精准编辑;同源重组;非同源末端连接
-
理性调控甲醇定向生物合成酵母单细胞蛋白的新策略
作者：罗会颖;姚斌
关键词：
