壳聚糖酶的基因克隆表达及酶学性质研究
文献类型: 中文期刊
第一作者: 王琦
作者: 王琦;崔阳;刘进宝;孙慧慧;郭娜;孙建安;毛相朝
作者机构:
关键词: 壳聚糖酶;壳聚糖;壳寡糖;克隆表达;酶学性质
期刊名称: 食品与生物技术学报
ISSN: 1673-1689
年卷期: 2019 年 01 期
页码: 147-155
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 作者从NCBI数据库中挖掘到来源于Butyrivibrio sp.MC2013的壳聚糖酶基因,命名为BUT,该壳聚糖酶基因大小为903 bp,编码301个氨基酸。通过NCBI数据库和进化树比对发现,该壳聚糖酶(BUT)属糖苷水解酶46家族(后简称GH-46),与其它壳聚糖酶相似度为59%,是一种新型的壳聚糖酶。序列经密码子优化后进行全基因序列合成,与表达载体pET21a(+)连接构建重组质粒p ET-21a-BUT,转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)表达宿主,进行诱导表达。所得重组壳聚糖酶通过Ni-NTA亲和层析进行纯化,SDS-PAGE确定其蛋白分子量为35 kDa,DNS法测定其酶活为146.0 U/mg。对BUT酶的酶学性质进行探究,结果表明BUT酶最适温度和pH分别为45℃、8.0,在中性偏碱性条件下稳定性较强。Mn~(2+)对其酶活力具有促进作用,SDS、Fe~(3+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)等的抑制作用极强。通过TLC对其水解产物分析发现,BUT水解壳聚糖的产物是壳二糖、壳三糖和壳四糖。
分类号: Q78`O636.1
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