腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因的克隆与表达载体的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 苗利光

作者： 苗利光;王克坚;刘艳环;陈立志;刘晓颖;徐敏;张洪涛

作者机构：

关键词： 腐蹄病;C型节瘤拟杆菌;基因克隆

期刊名称： 动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2002 年 23 卷 02 期

页码： 62-65

摘要： 用 PCR技术从腐蹄病 C型节瘤拟杆菌克隆出具有免疫保护性抗原 0 .85kb纤毛蛋白基因 ( pili基因 ) ,利用该基因构建了纤毛蛋白基因表达载体。提取 C型节瘤拟杆菌染色体DNA;用所设计的专一性引物进行 PCR,扩增出 pili基因 ;将 pili基因克隆于 TE载体 ,TE-pili重组质粒 pili基因序列测定结果正确 ,用 Eco R 酶切 ,低熔点胶回收 pili基因片段 ,经 klenow补平后 ,用 T4DNA连接酶将其与中间载体p PLλ连接 ,将 pili基因克隆于 p PLλ载体 ,经Bam H 、Bam H +Hind 、Dral酶切鉴定 pili基因正向插入 p PLλ载体 ;扩增 p PLλ-pili重组质粒 ,用 Bam H 酶切出 2 .1 kb大小片段 ,回收后 ,与 PME2 90表达质粒连接 ,转化宿主细胞PAK/ 2 pfs中 ,对获得的重组质粒用 Bam H 酶切 ,出现 2 .1 kb大小的带 ,证明含有目的基因

分类号： S852.61

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