表达FMDV B7多表位基因的重组PRRSV的拯救与复制水平的测定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 白伟杰

作者： 白伟杰;曹轶梅;包慧芳;孙普;付元芳;李平花;白兴文;陈应理;李坤;马雪青;刘在新;李冬;卢曾军

作者机构：

关键词： PRRSV;感染性克隆;FMDV;B细胞表位;病毒载体疫苗

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2016 年 46 卷 4 期

页码： 449-453

收录情况： CSCD

摘要： 利用北美PRRSV Fl12毒株感染性cDNA克隆,在病毒基因组ORF1b和ORF2a之间插入绿色荧光蛋白(EGFP)基因,构建了表达EGFP的重组PRRSV(vFl12- EGFP)。拯救病毒vFl12- EGFP感染Marc- 145细胞后,可观察到明显的细胞病变和绿色荧光,表明EGFP基因正确表达。随后,采用相同的策略构建了表达口蹄疫病毒(FMDV)B7多表位基因的重组PRRSV(vFl12-B7),拯救病毒vFl12- B7感染Marc- 145细胞后,可观察到典型的CPE;对拯救病毒进行RT- PCR扩增和序列测定,表明多表位基因正确插入;荧光定量PCR检测,第1代和第4代拯救病毒的拷贝数分别为3.76×10~5 copies/ L与1.58×10~8 copies/ L,说明重组病毒具有较好的复制能力,为以PRRSV为载体表达口蹄疫多表位基因活载体疫苗研究奠定了基础。

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