猪伪狂犬病病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈如敬

作者： 陈如敬;吴学敏;陈秋勇;严山;车勇良;王晨燕;王隆柏;周伦江

作者机构：

关键词： 猪伪狂犬病毒;gE基因;SYBR GreenⅠ;实时荧光定量PCR

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2016 年 43 卷 07 期

页码： 1717-1722

收录情况： 北大核心

摘要： 本研究根据猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的gE基因序列特点,设计特异性实时荧光定量引物,建立基于SYBR GreenⅠ染料的猪PRV实时荧光定量PCR方法。结果表明,建立的实时荧光定量PCR方法检测猪PRVgE基因在7.53×10~1~7.53×10~6拷贝/μL范围内有较好的线性关系;对猪圆环病毒(porcine circovirus2,PCV2)、猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)、副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)和猪链球菌(Streptococcus susi)核酸均未见阳性扩增信号;从生成的熔解曲线可见,建立的方法仅对猪PRV检测出现单一特异峰,其熔解温度(Tm值)为(92.9±0.1)℃,PCV2、PPV、副猪嗜血杆菌和猪链球菌均未见特异性峰值;建立的实时荧光定量PCR方法的组内和组间变异系数分别为0.31%~1.14%和0.42%~1.74%。以上结果表明,本研究建立的猪PRV实时荧光定量PCR方法敏感性高、特异性强、重复性好,为深入开展猪PRV对宿主致病机制的研究提供检测手段。

分类号： S852.65

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