黄瓜单性结实果实酵母双杂交文库的构建及CsCML25互作蛋白的筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 徐建

作者： 徐建;姚协丰;娄丽娜;朱凌丽;张曼;羊杏平;徐锦华

作者机构：

关键词： 黄瓜;单性结实;cDNA文库;酵母双杂交;CsCML25

期刊名称： 种子科技

ISSN： 1005-2690

年卷期： 2024 年 007 期

页码： 1-4

摘要： 为研究黄瓜单性结实形成的分子调控机制，以黄瓜单性结实自交系‘EC1’为材料，分别取开花前1 d至开花后4 d的子房，提取RNA后等量混合，采用SMART方法构建酵母双杂cDNA文库。结果表明，构建的文库总克隆数为1.16×107CFU，平均插入片段长度≥1 000 bp，阳性率为100%，符合建库的标准，可用于后续的酵母双杂交筛选。以黄瓜单性结实关键调控因子CsCML25为诱饵，构建pGBKT7-CML25诱饵蛋白表达载体，经自激活活性分析及不同浓度3AT对诱饵蛋白自激活活性抑制效果分析，使用SD-TLH+20 mM 3AT平板可完全抑制诱饵蛋白自激活活性。利用酵母双杂交筛选构建的黄瓜单性结实果实cDNA文库，得到96个初始阳性克隆。利用DNA测序、BLAST分析以及酵母回转验证等方法，最终获得27个可能与CsCML25相互作用的候选蛋白，为从分子水平探究CsCML25调控黄瓜单性结实的机制提供了理论基础。

分类号： S642.2

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