早熟马铃薯ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 何海旺

作者： 谭冠宁;何虎翼;何新民;王晖;李丽淑;唐洲萍

作者机构：

关键词： 马铃薯;ISSR;反应体系优化;引物筛选

期刊名称： 广东农业科学

ISSN： 1004-874X

年卷期： 2015 年 42 卷 01 期

页码： 133-137

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为得出马铃薯ISSR-PCR最佳的反应体系,采用正交试验设计,对r Taq DNA聚合酶、Mg2+、模板DNA、d NTPs和引物进行5因素4水平筛选。结果表明,马铃薯ISSR-PCR的最佳反应体系为:总体积25μL的反应体系中含有r Taq DNA聚合酶0.5 U、Mg2+浓度为2.5 mmol/L、模板DNA用量为75 ng、d NTPs浓度为200μmol/L、引物浓度为0.8μmol/L。这些因素对PCR反应的影响大小顺序为Mg2+浓度>r Taq DNA聚合酶用量>d NTPs浓度=引物浓度>模板DNA用量。应用该最佳反应体系对39条ISSR引物进行筛选,得出15条条带清晰、条带数多、重复性好的引物。并通过退火温度梯度试验得出筛选引物的最佳退火温度。

分类号： S532

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