鲤鱼2种脂酰辅酶A脱氢酶基因cDNA克隆、表达及活性研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 喻文娟

作者： 喻文娟;俞菊华;李红霞;李建林;唐永凯;于凡;何枫;傅纯洁

作者机构：

关键词： 鲤鱼;MCAD;LCAD;克隆;原核表达;酶活性

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2017 年 03 期

页码： 48-57

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为探究脂酰辅酶A脱氢酶对脂肪酸β氧化的调控机制,使用RT-PCR在鲤鱼肝脏克隆了脂酰辅酶A脱氢酶家族中的MCAD和LCAD全长c DNA序列,阅读框分别为1 275,1 326 bp,编码424,441个氨基酸,分析表明他们均具备ACADs家族的特征序列:FAD结合位点、底物结合位点、催化位点等,与斑马鱼MCAD和LCAD的一致性分别为93.16%和94.56%。实时定量RT-PCR结果表明,MCAD和LCAD主要在肝脏和心脏表达;不同脂肪源对MCAD的表达没有明显影响,但鱼油对LCAD的表达有明显的刺激作用。此外,构建了原核表达载体MCADs-p EASY(E2)和LCADs-pEASY(E2),经IPTG诱导获得了原核表达蛋白,分子量分别为43.0,43.6 kDa。经检测这2个蛋白在370,450 nm处有明显的吸收峰,表明他们能自然结合FAD辅基。吩嗪硫酸甲酯反应法结果表明:MCAD和LCAD酶活性最适温度均为28℃,酶活分别为9.12,10.29 U/g。结果表明,与哺乳动物类似,鲤鱼MCAD和LCAD在肝脏和心脏表达量高;高不饱和脂肪酸对LCAD的表达有促进作用。

分类号： Q78`S917.4

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