犬瘟热病毒A株核衣壳蛋白基因的克隆、表达及特性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 周洁

作者： 周洁;李昌文;张洪英;陈洪岩;李建伟;曲连东

作者机构：

关键词： 犬瘟热病毒;核衣壳蛋白;表达;反应活性;多克隆抗体

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2006 年 28 卷 04 期

页码： 485-488

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据GenBank中A75/14株犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的核苷酸序列设计合成一对引物,经RT-PCR从病毒总RNA中扩增出1600bp的N基因,将其克隆于pMD18-T载体对其进行序列分析。结果表明A株CDV与其它毒株N基因序列的同源性较高。将N基因定向克隆于原核表达载体pPROEXTMHT,用重组质粒pPROEXTMHT-N转化感受态E.coliDH5a细胞,用IPTG于37℃诱导表达了分子量约63Ku的重组N蛋白,占菌体总蛋白18%。经Westernblot分析证实所表达的重组N蛋白具反应活性,将表达产物用ProBondTM纯化试剂盒进行了纯化。用所获得的重组蛋白免疫家兔制备的多克隆抗体可与CDV全病毒发生特异性反应,经琼扩试验测定其效价为1∶16。本实验为下一步用重组N蛋白作为诊断用抗原,建立特异的CDV抗体检测方法奠定了基础。

分类号： S852.65

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