增强型猫ω干扰素的筛选及抗病毒活性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李茵

作者： 李茵;潘玉迪;田进;曲连东

作者机构：

关键词： 猫ω干扰素;真核表达;生物活性

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2022 年 002 期

页码： 195-201,213

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为获得增强型猫ω干扰素（FeIFN-ω），本研究通过分子对接方法预测和参考相关位点研究，设计3组定点突变引物。以pJET-FeIFN-ω为模板分别扩增FeIFN-ω基因及其3个突变基因（FeIFN-ω-R35L、FeIFN-ω-A156R、FeIFN-ω-T188R），并连接慢病毒载体pLVX-IRSE，构建重组质粒pLVX-FeIFN-ω、pLVX-FeIFN-ω-R35L、pLVX-FeIFN-ω-A156R、p LVX-FeIFN-ω-T188R。4个重组质粒分别与包装质粒psPAX2和膜蛋白质粒pMD2.G共转染293T细胞包装慢病毒，48 h后收获细胞上清即为慢病毒。分别将4个慢病毒转导293悬浮细胞（293s），扩大培养后收获细胞上清，经镍离子亲和层析柱纯化蛋白，并经SDS-PAGE检测、BCA法测蛋白浓度。结果显示，rFeIFN-ω、rFeIFN-ω-R35L、rFeIFN-ω-A156R、rFeIFN-ω-T188R在293s细胞中得到高效表达，且蛋白纯化效果好；经BCA法测浓度，4种重组蛋白浓度均约为200μg/mL，即获得了重组干扰素rFeIFN-ω、rFeIFN-ω-R35L、rFeIFN-ω-A156R、rFeIFN-ω-T188R。4种重组干扰素分别经猫肾细胞（CRFK）孵育18 h后接种猫杯状病毒（FCV）或猫疱疹病毒（FHV）12 h，经相对荧光定量PCR法检测干扰素抗FCV和FHV活性；4种重组干扰素分别经CRFK细胞孵育12 h，经相对荧光定量PCR法检测干扰素刺激基因ISG15、Viperin、IFITM1的转录水平，结果显示：实验组与空白对照组差异极显著（P<0.01），实验组中rFeIFN-ω-R35L、rFeIFN-ω-A156R与rFeIFN-ω均差异不显著（P>0.05）或表现为活性降低，rFeIFN-ω-T188R与rFeIFN-ω、rFeIFN-ω-R35L、rFeIFN-ω-A156R差异均显著（P<0.05）表现为活性增强，并且r FeIFN-ω-T188R抗病毒活性及诱导ISGs的转录水平均比rFeIFN-ω高1倍左右。选择r FeIFN-ω和rFeIFN-ω-T188R分别与His纯化树脂结合，加入等量表达干扰素受体（IFNAR1/R2）的重组质粒转染293T细胞的裂解液，4℃结合过夜，经western blot鉴定干扰素与IFNAR1/R2结合亲和力分析，结果显示，rFeIFN-ω-T188R与IFNAR1的结合能力比r FeIFN-ω高1倍左右，且两者与IFNAR2的结合能力差异不显著。本研究成功筛选到增强型rFeIFN-ω-T188R，为研究高效FeIFN-ω药物奠定了基础。

分类号： S859.7

  • 相关文献

[1]一种真核表达的抗H5N1-M1入胞单分子抗体的生物活性评价. 孙赫,王瑜,蔄弘扬,邱玥,田园,李泽鸿,岳玉环. 2023

[2]猪白介素4在CHO-K1细胞中的重组表达及生物学活性分析. 陈国华,景志忠,房永祥,王笑笑,窦永喜,蒙学莲,宋世斌. 2008

[3]猪视黄醇结合蛋白在毕赤酵母中的表达及检测. 张冬杰,谷溪,杨国伟,刘娣. 2009

[4]二化螟鞘磷脂合酶相关基因CsSMSr的克隆、真核表达及表达谱分析. 郑作林,周瀛,杨琼,巩中军,程家安,祝增荣. 2013

[5]生长抑素基因疫苗pES/2SS的构建与表达. 曹少先,何晓红,孙延鸣,刘铁铮,杨利国. 2007

[6]猪大肠杆菌LT基因位点突变、真核表达及小鼠免疫效果. 袁秀芳,王一成,徐丽华,刘邓,牛登元,王朝文. 2010

[7]岭南黄鸡肌生长抑制素基因成熟肽的克隆及酵母表达质粒的构建. 周红蕾,李春玲,王贵平,侯加法. 2008

[8]肝片吸虫GST真核表达载体构建及重组蛋白活性分析. 冉旭华,闻晓波,王春仁,刘娣,孙中武,李晓娟,王密. 2011

[9]抗菌肽SMAP-29在毕赤酵母中的表达. 任耀军,薄新文,王新华. 2008

[10]鸡β-防御素-1真核表达载体构建及其在Flp-In-293细胞中的表达. 单艳菊,胡艳,朱春红,束婧婷,丁晶,李慧芳,陈宽维. 2011

[11]日本乙型脑炎病毒NS3蛋白的真核表达及鉴定. 王双双,赵红梅,周丹娜,蔡行,耿超. 2019

[12]日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶抗原表位与霍乱毒素B亚基融合蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞的表达. 徐玉梅,曹士德,朱传刚,张世清. 2019

[13]卵泡抑素基因过表达对其通路上相关基因表达的影响. 孙亚蒙,张冬杰,张旭,汪亮,解宇,刘娣. 2013

[14]绵羊NICD基因的克隆、真核表达及其序列分析. 陈红玲,刘晨曦,孙亚伟,刘明军. 2014

[15]牛杀菌通透性增加蛋白N端在原核和真核细胞中的表达. 姚楠,白杰,张雪梅,吴卫东,李文蓉. 2012

[16]山羊Viperin基因的克隆与真核表达载体的构建. 李照耀,李文良,吴铖楠,李基棕,郝飞,毛立,周斌,江杰元. 2017

[17]日本乙型脑炎病毒NS5rdrp蛋白的真核表达及鉴定. 耿超,赵红梅,周丹娜,蔡行,王双双. 2019

[18]虎源犬瘟热病毒核酸疫苗构建及免疫原性初步研究. 张贺,翟少伦,罗满林,吕殿红,温肖会,魏文康. 2018

[19]鸭疫里氏杆菌OmpA基因真核表达载体构建及免疫效果初步评价. 余波,李婷,徐景峨,张亚楠,姜玲玲,周思旋,卜仕金. 2021

[20]猴源葡萄糖调节蛋白78生物信息学分析及其真核表达. 焦文强,刘运超,邢广旭,陈鹏举,徐引弟,王治方,张青娴,许峰. 2021

作者其他论文 更多>>

微信小程序