重组猪肺表面活性蛋白A在昆虫杆状病毒表达系统的表达及体外抗PRRSV活性初步鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李兰

作者： 李兰;郑其升;张元鹏;李鹏成;肖希龙;付言峰;侯继波

作者机构：

关键词： 猪;表面活性蛋白A;杆状病毒表达;猪繁殖与呼吸综合征病毒;抗病毒活性

期刊名称： 中国农业大学学报

ISSN： 1007-4333

年卷期： 2017 年 22 卷 04 期

页码： 101-108

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研究重组猪肺表面活性蛋白A(RpSP-A)的抗病毒活性,采用Bac-to-Bac系统对RpSP-A蛋白进行表达。首先PCR扩增目的基因并将其克隆至pFastBac1转移载体获得pFast-SP-A,通过转化DH10Bac感受态细胞获得重组Bacmid,然后转染sf9细胞获得重组杆状病毒rBV-SP-A,在sf9细胞上进行目的蛋白的表达,经镍柱纯化、脱盐柱处理后,采用蚀斑减少方法评价RpSP-A对PRRSV感染Marc-145细胞的抑制作用。结果显示RpSP-A在sf9细胞中得到正确表达,并且能够降低PRRSV在Marc-145细胞上的感染,补加Ca~(2+)时30μg/mL RpSP-A抑制率高达77%,15μg/mL RpSP-A抑制率为43%,未补加Ca~(2+)时RpSP-A没有表现出抑制作用。上述结果表明利用Bac-to-Bac系统可以稳定获得大量具有抗PRRSV作用的可溶性RpSP-A。

分类号： S852.65

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