非洲猪瘟病毒O174L蛋白的真核表达载体构建及分子特征分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 沙嘎那日·吉日木图

作者： 沙嘎那日·吉日木图;林晓;沈兆基;郭肖蓉;李奎;贾红;周荣

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒;O174L基因;真核表达;分子特征

期刊名称： 中国农业科技导报

ISSN： 1008-0864

年卷期： 2024 年 26 卷 004 期

页码： 114-127

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为分析非洲猪瘟病毒O174L基因,通过同源重组方式将O174L基因连接至pRK5M-C-2×Strep载体,构建重组质粒,经PCR扩增和测序鉴定正确后,将重组质粒转染至猪小肠上皮细胞系(porcine intestinal columnar epithelial cells,IPEC-J2)中,通过免疫荧光和Western blot检测O174L蛋白的表达情况.PCR及测序结果显示,pRK5M-C-2×Strep-O174L重组质粒构建成功.免疫荧光和Western blot检测结果显示,O174L蛋白能够在IPEC-J2细胞中稳定表达.生物信息学分析结果显示,基于O174L基因和B646L(p72)基因序列构建各分离毒株的2个系统发育树间排列高度相似.来自中国的16株分离株中,O174L基因序列的相似性高达96.76%~100.00%.其中,与中国爆发的其他Ⅱ型分离株相比,China/2018/AnhuiXCGQ在O174L蛋白的第67、75及110位氨基酸存在差异,GZ201801在第110位氨基酸存在差异.Ⅰ型分离株 SD/DY-I/2021和 HeN/ZZ-P1/2021的O174L蛋白的氨基酸序列分别在第13、73、93、95、113和114位上与其他中国Ⅱ型分离株存在差异.O174L蛋白为稳定的亲水蛋白,没有信号肽和跨膜区;其二级结构由α螺旋、β折叠和无规则卷曲组成,三级结构预测结果与二级结构预测相符.以上结果为深入研究ASFV O174L蛋白与宿主间的相互作用和遗传进化提供了基础.

分类号： S858.28%Q78

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