鹅VDR基因克隆及其多克隆抗体制备与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 秦逸飞

作者： 秦逸飞;陈蓉;施振旦

作者机构：

关键词： 鹅;VDR基因;克隆;多克隆抗体

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN：

年卷期： 2024 年 003 期

页码： 1194-1202

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】维生素D3（vitamin D3,VD3）是一类重要的类固醇激素，参与调控动物体内多种生理活动，具有生物活性的VD3代谢物1,25（OH）2D3通过与维生素D受体（vitamin D receptor, VDR）结合发挥生物学功能。试验旨在克隆鹅VDR基因CDS序列并制备鹅VDR多克隆抗体，为后续开展VDR介导VD3调控鹅体内多种生理活动的分子机制研究提供基础支撑。【方法】通过基因克隆方法获得鹅VDR基因CDS序列，并采用生物信息学方法对其编码蛋白进行结构和功能预测分析。通过基因合成和亚克隆方法构建鹅VDR基因重组表达质粒，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导表达和镍柱纯化后获得鹅VDR重组蛋白。以纯化的鹅VDR重组蛋白作为免疫原，制备兔抗鹅VDR多克隆抗体，采用间接ELISA法检测抗体效价，采用Western blotting检测抗体特异性。【结果】试验成功克隆了鹅VDR基因编码区序列，长度为1 356 bp,编码451个氨基酸残基。该编码蛋白与鸡VDR蛋白的相似性高达91.4%,无信号肽和跨膜结构域，N-端含有核定位序列，且含有DNA结合域和配体结合域2个保守结构域，属于类固醇/甲状腺激素受体超家族成员。试验成功构建了pET-30a（+）-VDR重组质粒，并诱导表达鹅VDR重组蛋白。纯化后的重组蛋白纯度高达90%以上，且大小符合预期（52 ku）。试验制备了兔抗鹅VDR多克隆抗体，其抗体效价＞1∶1 093 500;除肝脏组织外，该多克隆抗体在产蛋鹅肾脏、十二指肠、空肠和回肠组织中均能够识别天然VDR蛋白的2种亚型。【结论】试验成功克隆了鹅VDR基因CDS序列，并制备了兔抗鹅VDR多克隆抗体，该多克隆抗体特异性高，可用于后续鹅体内VDR介导的生物学功能研究。

分类号： S835

  • 相关文献

[1]鹅催乳素受体多克隆抗体制备及组织表达分析. 邢光东,杨廷桂,段修军,宦海琳,闫俊书,王根林. 2011

[2]皖西白鹅PIT-1基因的克隆及早期表达规律. 程金花,徐琪,乔娜,王学斌,段修军,张康宁,陈国宏. 2011

[3]鹅p21基因克隆、启动子分析及转录调控研究. 陈哲,杨鹏霞,雷明明,陈佳彬,闫乐艳. 2022

[4]鹅乙酰辅酶A酰基转移酶1基因的克隆、表达及生物信息分析. 刘毅,李光全,龚绍明,何大乾. 2020

[5]鹅源I型禽副粘病毒JG97株F基因的分子特性分析. 刘梅,李文良,戴亚斌,冯太兰,王海丽,周新民. 2008

[6]鹅IGF-Ⅰ基因5’调控区序列的克隆与分析. 王雷,王宝维,贾晓晖,杨志刚,刘光磊,张名爱,张旭晖,龙芳羽. 2007

[7]鹅MLPH基因分子克隆、组织表达及SNP检测. 刘杰,刘毅,王翠,杨云周,王惠影,刘安芳,何大乾. 2016

[8]鹅源Ⅰ型禽副粘病毒JG97株F基因的分子特性分析. 刘梅,李文良,戴亚斌,冯太兰,王海丽,周新民. 2008

[9]绵羊肌肉抑制素C-端的表达、纯化及多克隆抗体的制备. 马毅,舒建洪,李晴,关宏,安晓荣,陈永福. 2009

[10]灰飞虱原肌球蛋白的基因克隆、原核表达及多克隆抗体制备. 徐秋芳,陈晴晴,倪海平,李硕,张金凤,周益军. 2014

[11]创伤弧菌外膜蛋白OmpU的基因克隆与表达. 李素一,吴唯维,李盼,柯翎,许斌福,林晨韬,林天龙,陈叙. 2013

[12]鸽子瘦素基因成熟肽重组蛋白的表达及多克隆抗体的制备. 雷明明,邵西兵,施振旦. 2017

[13]莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白基因gap45、gap50、myo A和mlc的克隆表达与多克隆抗体制备. 王锦明,刘爱红,任巧云,马米玲,刘志杰,李安岩,李有全,赵帅阳,张浩浩,殷宏,罗建勋,关贵全. 2013

[14]莫氏巴贝斯虫actin,aldolase和trap基因的克隆表达与多克隆抗体的制备. 王锦明,杨吉飞,李安岩,刘爱红,任巧云,马米玲,刘志杰,李有全,赵帅阳,张浩浩,殷宏,罗建勋,关贵全. 2013

[15]莫氏巴贝斯虫actin;aldolase和trap基因的克隆表达与多克隆抗体的制备. 王锦明,杨吉飞,李安岩,刘爱红,任巧云,马米玲,刘志杰,李有全,赵帅阳,张浩浩,殷宏,罗建勋,关贵全. 2013

[16]禽白血病劳斯肉瘤病毒衣壳蛋白P27基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备. 乔彩霞,关云涛,陈洪岩,刘怀然,蔡雪辉,李昌文,葛俊伟,刘家森. 2004

[17]莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白基因gap45、gap50、myoA和mlc的克隆表达与多克隆抗体制备. 王锦明,刘爱红,任巧云,马米玲,刘志杰,李安岩,李有全,赵帅阳,张浩浩,殷宏,罗建勋,关贵全. 2013

[18]茶尺蠖水通道蛋白EoAQP1的cDNA克隆、多克隆抗体制备及亚细胞定位. 李良德,王定锋,刘丰静,李慧玲,张辉,吴光远. 2016

[19]鸡白介素18成熟肽基因原核表达及抗血清的制备. 张海玲,冉多良,刘培欣,闫丽辉,曹殿军. 2006

[20]莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白基因gap45、gap50、myo A和m/c的克隆表达与多克隆抗体制备. 王锦明,刘爱红,任巧云,马米玲,刘志杰,李安岩,李有全,赵帅阳,张浩浩. 2013

作者其他论文 更多>>

微信小程序