临床等级质粒DNA的实验室制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 皮文辉

作者： 皮文辉;宋志强;刘守仁

作者机构：

关键词： 临床等级质粒DNA;色谱制备;质量控制

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2009 年 0 卷 05 期

页码： 135-138+126

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 在实验室有效获得100 mg临床试验等级的质粒DNA。摇床发酵3个批次,每批次4 L培养液,产生大约160 g的细菌沉淀物。碱裂解菌体,气浮法结合离心分离浮杂沉淀。裂解液经0.45/0.22μm囊式过滤器过滤。然后采用阴离子色谱介质富集质粒,异丙醇沉淀。重新溶解沉淀后采用100 kD切向流超滤处理,获得100 mg临床试验等级质粒DNA。体外、体内转染试验对质粒表达效果进行了鉴定。结果表明,纯化的质粒DNA几乎检测不到内毒素、RNA和蛋白质,A260/A280比值在1.82～1.86范围内。纯化的质粒DNA能够满足动物临床试验。

分类号： Q78

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