多房棘球蚴RNA结合蛋白EWS的原核表达及其细胞定位与功能的初步鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 严玉婷

作者： 严玉婷;郭小腊;孙玥;何学东;丁军涛;郑亚东

作者机构：

关键词： 多房棘球蚴;RNA结合蛋白EWS基因;原核表达;多克隆抗体;免疫荧光

期刊名称： 动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2023 年 44 卷 012 期

页码： 29-35

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过对多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis)RNA结合蛋白EWS(EmEWS)基因的原核表达、抗体制备、细胞定位等研究,初步探究EmEWS基因特征以及与RNA的结合能力.根据 Worm-base数据库中EmEWS基因序列设计引物,利用RT-PCR扩增EmEWS基因并构建重组表达质粒,诱导表达、纯化重组蛋白,制备EmEWS多克隆抗体后进行 Western blot、实时荧光定量PCR、免疫荧光定位、双荧光测定.结果表明,EmEWS基因长度为1 485 bp,编码495个氨基酸,在多房棘球蚴原代细胞中表达量较高,在原头蚴中最低.生物信息学分析表明,细粒棘球蚴EWS与EmEWS相似性高达98.3%,且EmEWS的RBD结构域在绦虫中高度保守.EmEWS重组蛋白大小约为54 ku,制备的多克隆抗体可识别多房棘球绦虫中天然EmEWS蛋白.细胞定位显示EmEWS主要分布在细胞膜上.双荧光试验证明EmEWS可以与结合富含UG的RNA序列结合.综合上述结果,推测EmEWS可能作为转录调控因子参与小RNA的形成,同时有助于核蛋白的运输.

分类号： S852.724%Q789

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