猪NLRC5对PK15细胞中SLA Ⅰ类分子表达的调控研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘英华

作者： 刘英华;马丽娜;王有祺;高彩霞;陈洪岩

作者机构：

关键词： PK15细胞;猪NLRC5;SLA Ⅰ类分子;表达

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN：

年卷期： 2021 年 007 期

页码： 746-752

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为探究猪核苷酸结合寡聚化结构域样受体（NLR）家族端酶募集（CARD）结构域-5（NLRC5）在PK15细胞中的表达情况及其对猪白细胞抗原I类分子（SLA I）表达的调控作用,本研究利用不同终浓度（1μg/mL、1.5μg/mL、2μg/mL）Poly I:C刺激PK15细胞后24 h,通过荧光定量PCR（qPCR）和western blot方法分别检测NLRC5 mRNA转录水平和蛋白的表达水平;设计NLRC5的3条siRNA和对照siRNA分别转染PK15细胞48 h后,分别采用qPCR和western blot检测PK15细胞中NLRC5 mRNA转录水平和蛋白表达水平,从而筛选出最优敲低NLRC5表达的siRNA;将筛选出的最优siRNA和对照siRNA分别转染PK15细胞48 h后,采用qPCR分别检测PK15细胞中NLRC5和SLA I类分子mRNA的转录水平,采用western blot检测PK15细胞中NLRC5蛋白表达水平,通过流式细胞术检测PK15细胞表面SLA I类分子的表达。构建重组质粒pCAGGS-HA-NLRC5并鉴定正确后转染PK15细胞,48 h后,采用qPCR分别检测PK15细胞中NLRC5和SLA I类分子mRNA的转录水平,采用western blot检测PK15细胞中NLRC蛋白表达水平,通过流式细胞术检测PK15细胞表面SLA I类分子表达水平。结果显示,与正常PK15细胞相比,经不同浓度Poly I:C刺激后PK15细胞中NLRC5 mRNA转录水平和蛋白水平均显著升高（p<0.01）。siRNA的筛选结果显示,NLRC5-sus-3为最优siRNA;将其转染PK15细胞后的qPCR和流式细胞术检测结果显示,与转染对照siRNA的PK15细胞相比,敲低NLRC5的PK15细胞中SLA I类分子的mRNA转录水平（p<0.01）和细胞表面SLA I类分子的表达水平均显著降低（p<0.01）;重组质粒pCAGGS-HA-NLRC5转染PK15细胞后的结果显示,NLRC5 mRNA转录水平和蛋白水平均显著增高（p<0.01）,表明NLRC5在PK15细胞中获得了过表达。qPCR和流式细胞术结果显示,过表达NLRC5后的PK15细胞中SLA I类分子mRNA的转录水平（p<0.01）和其在细胞表面的表达量均升高（p<0.05）。综上所述,经Poly I:C刺激可促进PK15细胞中NLRC5的表达,且NLRC5对SLA I类分子的表达具有正调控作用。本实验是首次在猪源细胞中进行了NLRC5对SLA I类分子表达的调控研究,为进一步探究机体在病原感染过程中的免疫防御机制提供了新思路。

分类号： S828

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