不同玉米转化体通用PCR检测体系建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王晶

作者： 王晶;张晓磊;白玉;盛宇欣;关海涛;温洪涛

作者机构：

关键词： 转化体;聚合酶链式反应;扩增体系;反应条件;玉米

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2024 年 40 卷 012 期

页码： 34-44

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】为解决不同转化体扩增体系和反应条件不统一问题，建立通用PCR检测体系，进而提升转化体鉴定效率。【方法】通过收集国内外转基因材料的转化体特异性PCR鉴定方法，比较其扩增体系和反应条件的差异，选择其中使用频率最高的参数作为通用参数。利用不同玉米转基因材料，验证转化体特异性通用PCR定性检测方法。【结果】建立通用普通PCR扩增体系：总体积25.0 μL、25 mmol/L MgCl2溶液1.5 μL、2.5 mmol/L dNTPs混合溶液2.0 μL、靶标和内参上下游引物终浓度0.4 μmol/L、Taq DNA聚合酶0.025 U/μL、25 mg/L DNA模板2.0 μL，LOD 0.1%；反应条件：94℃预变性5 min、94℃变性30 s、58℃退火30 s，72℃延伸30 s、共进行35次循环、72℃终延伸7 min。通用实时荧光PCR定性鉴定扩增体系：总体积20.0 μL、25 mmol/L MgCl2溶液2.0 μL、dNTPs混合溶液（各2.5 mmol/L）1.6 μL、靶标和内参上下游引物和探针终浓度0.4 μmol/L、Taq DNA聚合酶0.04 U/μL、25 mg/L DNA模板2.5 μL，LOD 0.1%；反应条件为95℃预变性5 min、95℃起始变性15 s、60℃退火延伸60 s、40个循环。【结论】不同转化体材料可以利用本研究建立的通用PCR扩增体系和反应条件进行检测。

分类号： S513%Q943.2

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