SS-HPS-APP三联亚单位疫苗对小鼠保护效果的评价

文献类型： 中文期刊

第一作者： 龚俊

作者： 龚俊;栾慧;栾天;赵谦;乔宏;李刚;刘思国;王春来

作者机构：

关键词： 猪链球菌病;副猪嗜血杆菌病;猪传染性胸膜肺炎;亚单位疫苗;小鼠免疫效力评价

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN：

年卷期： 2021 年 009 期

页码： 978-984

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为评价猪链球菌病-副猪嗜血杆菌病-猪传染性胸膜肺炎三联亚单位疫苗（下称三联苗）对小鼠的保护效果,本研究将猪链球菌（SS）保护性抗原EF和猪胸膜肺炎放线杆菌（APP）保护性抗原OMP、ApxI、ApxII序列分别克隆至pET-28a和pCold-sumo载体,再转化至E. coli BL21（DE3）中构建重组菌,经过诱导表达纯化获得重组蛋白r EF、rOMP、rApxI和rApxII。利用本研究室前期构建的pET-28a-sly/BL21、pET-28a-mrp/BL21、pET-28aoppa/BL21、pET-28a-oppa2/BL21、pET-28a-afua/BL21、pET-22b-cdtb/BL21 6株重组表达菌株,表达纯化SS的rSLY、rMRP和副猪嗜血杆菌（HPS）的r OPPA、rOPPA2、rAfuA、rCdtB。将上述重组蛋白等量混匀,使每一剂疫苗中各蛋白的含量均为20μg,再与ISA 201佐剂乳化制成三联苗。将血清2型SS（SS2）464株和SS9 GZ2株按照不同比例稀释后感染C57小鼠;将血清5型HPS（HPS5）HN10株、HPS13 ZD12株、血清5型APP（APP5）MD株和APP7 S-8株按照不同比例稀释后感染BALB/c小鼠,统计上述6个菌株对小鼠的最小致死剂量（MLD）。将20只C57小鼠和40只BALB/c小鼠均分成2组（每组含10只C57小鼠和20只BALB/c小鼠）,间隔14 d分别皮下免疫2次300μL PBS+ISA 201佐剂和三联苗。二免后14 d采集小鼠血清,通过间接ELISA检测各组小鼠的EF、MRP、SLY、OPPA、OPPA2、CdtB、AfuA、OMP、ApxI和ApxII的抗体水平。首免后28 d,将C57小鼠再按照免疫组别平均分为2组,分别以MLD的SS2和SS9攻菌;同理,将BALB/c小鼠再平均分为4组,分别以MLD的HPS5、HPS13、APP5和APP7攻菌。结果显示:SS2和SS9对C57小鼠的MLD均为5×107cfu/只,HPS5、HPS13、APP5和APP7对BALB/c小鼠的MLD分别为1.5×108cfu/只、5×107cfu/只、1.5×108cfu/只和7.5×108cfu/只。与免疫前相比,二免后14 d实验组小鼠体内对EF、SLY、MRP、OPPA、OPPA2、CdtB、AfuA、OMP、ApxI和ApxII的抗体水平显著升高（p<0.0001）,对照组小鼠体内对10种抗原的抗体水平均无差异;实验组与对照组二免后抗体水平差异显著（p<0.0001）。攻菌实验中,对照组小鼠在观察期内全部死亡,攻菌SS2、SS9、HPS5、HPS13、APP5和APP7的实验组小鼠存活率分别为100%（5/5）、80%（4/5）、60%（3/5）、80%（4/5）,80%（4/5）,100%（5/5）,对照组和实验组的存活率有显著差异（p<0.05）。以上结果表明该三联苗对SS2、SS9、HPS5、HPS13、APP5和APP7攻击的小鼠能够提供良好的交叉保护性。本研究首次系统研究并证实了该三联苗的免疫保护结果较好,为其进一步研究及应用提供了实验依据。

分类号： S859.797

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