鸭RLRs和IFN基因SYBRGREENⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈翠腾

作者： 陈翠腾;傅光华;黄瑜;傅秋玲;万春和;程龙飞;陈红梅;施少华

作者机构：

关键词： RIG-I样受体;干扰素;实时荧光定量PCR

期刊名称： 福建农业学报

ISSN： 1008-0384

年卷期： 2015 年 03 期

页码： 209-215

摘要： 首次建立以GAPDH为内参,同时检测鸭RIG-I、MDA5、IFN-α和IFN-γ等4种mRNA相对表达量的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法(RT-FQ-PCR)。以目的基因的克隆质粒为标准品,建立标准曲线,并进行熔解曲线、重复性及稳定性分析。该方法 Ct值线性范围为12.0~32.0;目的基因(RIG-I、MDA5、IFN-α、IFN-γ)和内参基因(GAPDH)的扩增效率均在95%~105%,其相关系数均在0.99以上;扩增产物的熔解曲线都只出现1个特异性单峰,无引物二聚体或其他非特异性产物生成,RIG-I、MDA5、IFN-α、IFN-γ和GAPDH的Tm值依次为(81.9±0.33)、(81.9±0.32)、(93.6±0.23)、(81.8±0.28)、(87.8±0.24)℃,其敏感度均达到100copies·μL-1,重复性和稳定性好,为从mRNA水平上深入研究RIG-I样受体、干扰素与鸭机体免疫功能相关性奠定了基础。

分类号： S834

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