大鼠微小病毒和细小病毒双重荧光定量PCR检测方法建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 孙竹筠

作者： 孙竹筠;蔡骁垚;熊炜;陈懿斐;张泉;李泽君;魏晓锋;陈鸿军

作者机构：

关键词： 大鼠微小病毒(RMV);大鼠细小病毒(RPV);TaqMan探针;荧光定量PCR

期刊名称： 实验动物与比较医学

ISSN： 1674-5817

年卷期： 2017 年 37 卷 05 期

页码： 372-377

摘要： 目的建立快速、准确地同时检测和鉴别大鼠细小病毒(RPV)和大鼠微小病毒(RMV)的双重TaqMan实时荧光定量PCR方法。方法根据GenBank中已公布的RMV NTU1株全基因组序列(JX627317.1),在1 705～1 808 nt处设计引物和TaqMan探针,根据RPV NTUI毒株的全基因组序列(JX827169),在863-967nt处设计引物和TaqMan探针。以构建的质粒参考物为模板建立荧光定量PCR检测方法,并对该鉴别检测方法的灵敏度、稳定性和特异性进行评价;用建立的荧光定量方法对50份临床样品进行检测,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)的商品试剂盒进行验证。结果建立的RMV和RPV的鉴别荧光定量PCR方法标准曲线的线性关系良好,R2值可达0.99,最低检测限均为10拷贝数/μL;应用鉴别荧光定量PCR方法和ELISA检测试剂盒,对100份大鼠肝脏和50份血清样品病料进行检测,结果均为阴性。结论建立的RMV和RPV的TaqMan实时荧光定量PCR方法具有特异、灵敏的特点,适用于RMV和RPV的临床监测。

分类号： S858.91

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