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瘤胃总甲烷菌实时荧光定量PCR方法的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 李长青 1 ; 金海 1 ; 栗原光规 2 ;

作者机构： 1.内蒙古农牧业科学院

2.日本国家农业生物资源研究所

关键词： 瘤胃甲烷菌;实时荧光定量PCR;标准品质粒;标准曲线

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2009 年 09 期

页码： 13-15

收录情况： 北大核心

摘要： 试验构建了瘤胃总甲烷菌实时荧光绝对定量PCR的标准品及标准曲线用于总甲烷菌的定量测定,并提取瘤胃微生物总DNA,以甲烷菌特异性引物进行PCR扩增,回收纯化PCR产物,与pBS-T载体连接并转化到大肠杆菌,再用氨苄西林培养基筛选阳性重组质粒,提取含目的片段质粒DNA,通过PCR及测序鉴定重组质粒。根据OD值确定浓度,将梯度稀释的质粒作为模板,进行荧光定量PCR反应并作出标准曲线。结果表明:所构建的标准曲线具有很高的相关性(R2=0.992),并获得了高扩增效率产物。

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