文献类型： 中文期刊

作者： 周勇 ¹ ; 曾令兵 ² ; 范玉顶 ² ; 徐进 ² ; 马杰 ² ; 罗晓松 ² ; 肖艺 ² ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院长江水产研究所

2.中国水产科学研究院长江水产研究所;华中农业大学水产学院

关键词： 草鱼呼肠孤病毒;VP6蛋白编码基因;TaqManreal-timePCR;检测

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2011 年 35 卷 05 期

页码： 137-142

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用RT-PCR技术扩增出草鱼呼肠孤病毒(GCRV)VP6蛋白编码区长度为1 250 bp的片段,克隆到pEGFP-N1载体上,构建重组质粒pEGFP-N1-VP6。经PCR鉴定确认正确后,以10倍梯度稀释pEGFP-N1-VP6重组质粒,作为标准模板进行TaqMan real-time PCR扩增,制作标准曲线,建立了草鱼呼肠孤病毒的荧光定量PCR检测方法。检测结果显示,标准曲线的相关系数(R2)达到0.998 09,斜率为-3.373;对初始模板定量检测的范围为1×101～1×106copies/μL;特异性试验结果表明,该方法可特异性地检测出草鱼呼肠孤病毒,而对鲤春病毒血症病毒(SVCV)、传染性造血器官坏死症病毒(IHNV)无检测信号。本研究建立的草鱼呼肠孤病毒TaqMan real-time PCR方法灵敏度高、特异性强,可进行定量分析,对草鱼出血病快速诊断与病毒病原定量检测有重要意义。