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利用显微注射技术冷冻保存牙鲆胚胎

文献类型： 中文期刊

作者： 丁浩 1 ; 田永胜 1 ; 武鹏飞 1 ; 刘洋 1 ; 陈松林 1 ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室

关键词： 牙鲆;胚胎;显微注射;玻璃化;冷冻保存

期刊名称： 中国水产科学

ISSN： 1005-8737

年卷期： 2008 年 15 卷 05 期

页码： 866-872

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 在鱼类胚胎的冷冻保存中,需要抗冻剂有效地渗入胚胎,才能对胚胎起到保护作用。本研究采用显微注射技术将抗冻剂直接注射到牙鲆(Paralichthys olivaceus)胚胎内,以实现牙鲆胚胎的玻璃化低温冷冻保存。研究中,首先对抗冻剂种类进行了选择,将抗冻剂的毒性由大到小依次排列为:乙二醇(EG)、甘油(Gly)、二甲基亚砜(DMSO)、甲醇(MeOH)、1,2丙二醇(PG)、PM21(PG∶MeOH=2∶1);对胚胎发育时期和注射剂量进行了筛选。实验结果显示,注射600pL(1pL=10-6mL)抗冻剂PM21后,牙鲆的心跳期胚胎成活率显著高于尾芽期胚胎(P<0.05),成活率为(64.04±2.05)%;对卵黄囊、卵膜与卵黄膜间隙作为注射部位进行了选择,发现采用卵黄囊内注射的胚胎成活率高于"五步平衡法",并显著高于通过卵黄膜间隙注射(P<0.05),其成活率为(44.24±7.88)%。结果表明,注射600pL35%PM21至牙鲆心跳期胚胎卵黄囊内,平衡10min,然后进行玻璃化冷冻保存,取得了68.2%~79.4%透明胚胎,能够对牙鲆胚胎提供很好的保护。说明显微注射方法可以成功地将抗冻剂注射入牙鲆胚胎,并在牙鲆胚胎的冷冻及胚胎的完整性方面发挥有效的保护作用。

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