文献类型： 中文期刊

作者： 熊爱生 ¹ ; 姚泉洪 ¹ ; 彭日荷 ¹ ; 陈建民 ² ; 李贤 ¹ ; 范惠琴 ¹ ;

作者机构： 1.上海市农业遗传育种重点实验室上海市农业科学院生物技术研究中心

2.扬州大学生物科学与技术学院

关键词： β-葡萄糖苷酸酶;体外分子进化;基因重排;耐高温

期刊名称： 遗传学报

ISSN： 0379-4172

年卷期： 2002 年 29 卷 11 期

页码： 1034-1040

收录情况： SCI ; 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用高保真聚合酶从质粒pBI12 1中扩增出 1.8kb的专一条带 ,克隆入pBluescriptSK载体 ,测序结果显示与报道一致。该克隆GUS基因被用作对照 ,再以此为模板 ,通过DNA重排技术 ,经DNaseⅠ降解 ,PrimerlessPCR ,PrimerPCR重新得到大量的突变GUS基因。这些突变的GUS基因构建入原核表达载体pG2 5 1中 ,电击转化大肠杆菌菌株DH5α ,构建GUS基因突变体库 ,经过 3轮的重排、筛选得到 80℃处理 30分钟仍显示较高活性的耐高温GUS基因GUS3 3,基因测序显示 ,GUS3 3与GUS基因之间的同源性为 99.2 % ,核苷酸序列推导的氨基酸序列显示 ,11个氨基酸发生了突变 ,80 %的突变集中在蛋白的C端。Tm值GUS3 3为 80℃ ,GUS ck为 5 5℃ ,提高了 2 5℃ ,GUS3 3β -葡萄糖苷酸酶热稳定性有了很大的提高 ,GUS3 3酶的最适温度明显提高。