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酶联适配体可视化检测牛妊娠相关糖蛋白9(bPAG9)及其在奶牛早孕检测中的应用

文献类型： 中文期刊

作者： 卢春霞 1 ; 刘长彬 2 ; 周平 2 ; 林祥群 3 ;

作者机构： 1.长江师范学院现代农业与生物工程学院

2.新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室

3.新疆石河子职业技术学院

关键词： 妊娠相关糖蛋白（PAGs）;适配体;早期妊娠诊断;酶联适配体分析（ELAA）;奶牛

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN：

年卷期： 2021 年 007 期

页码： 1407-1416

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 免疫分析测定妊娠相关糖蛋白（pregnancy-associated glycoproteins, PAGs）是目前常用的家畜早期妊娠检测方法,但是抗体作为识别分子存在制备周期长、成本高等缺点。为丰富奶牛（Bos taurus）早期妊娠诊断技术,降低检测成本,本研究以牛（bovine）妊娠相关糖蛋白（bPAG）的核酸适配体为识别分子,基于双适配体夹心原理,建立了一种bPAG的可视化检测方法,并对适配体浓度、适配体-辣根过氧化物酶浓度、封闭剂浓度、反应时间、包被缓冲液等条件进行了优化。结果显示,在优化条件下,b PAG9在0.5～100ng/mL浓度范围内呈良好线性（R=0.998）,检测限为0.22 ng/mL,目测可视化检测限0.5 ng/mL。采用3个梯度浓度（1, 10, 100 ng/mL）的bPAG9做空白样品添加实验,平均加标回收率为93.2%～105.8%,相对标准偏差为3.51%～7.13%。将建立的方法应用于人工授精30 d后的奶牛血清检测,并采用超声波检测法进行对比验证,本方法妊娠诊断准确率达到91.7%。本研究为奶牛早期妊娠诊断提供一种简便、经济、可靠的快速检测新技术。

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