文献类型： 中文期刊

作者： 李炳坤 ¹ ; 郑毅恒 ² ; 王飞 ¹ ; 成莉凤 ³ ; 李丁 ⁴ ;

作者机构： 1.江西农业大学生物科学与工程学院

2.河南科技大学食品与生物工程学院

3.中国农业科学院麻类研究所

4.江苏省农业科学院动物免疫工程研究所

关键词： 毕赤酵母;酸性蛋白酶PrA;信号肽;基因剂量;分子伴侣;高密度发酵

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2024 年 64 卷 009 期

页码： 3314-3329

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】本研究致力于获得酸性蛋白酶PrA的高产酵母菌株，以便在食品加工、饲料添加剂等领域进行应用。【方法】构建毕赤酵母表达菌株，在摇瓶水平重组表达PrA并检测其酶学性质。通过信号肽改造、基因剂量优化、共表达分子伴侣等措施逐步提高PrA产量，并利用高密度发酵进一步提高表达水平。【结果】PrA的比酶活为3 974.00 U/mg，最适反应pH为3.0，最适反应温度为45℃。初始菌株的PrA产量达到738.03 U/mL。通过使用MF4I信号肽将PrA产量提高至1 206.52 U/mL，增加PrA基因拷贝数导致产量提高至2 406.47 U/mL。进一步共表达分子伴侣或分子伴侣组合将PrA产量提高至4091.27U/mL。经过高密度发酵，发酵168h酶活达到43 088.00 U/mL，与初始产量相比提高58.4倍。【结论】在毕赤酵母中成功实现了酸性蛋白酶PrA的高效表达，为其未来的工业化应用奠定了基础。这些结果为进一步研究和开发该酶在食品加工和饲料添加剂领域的应用提供了重要参考。