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以P型PRSV-VPg为模板多位点突变获得W型PRSV-VPg的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 胡正龙 1 ; 肖旭倩 2 ; 沈文涛 2 ; 言普 2 ; 周鹏 2 ;

作者机构： 1.海南大学

2.海南大学;中国热带农业科学院热带作物生物技术研究所

关键词： PRSV-VPg;基因改造;长引物延伸;套叠PCR.

期刊名称： 生命科学研究

ISSN： 1007-7847

年卷期： 2009 年 13 卷 02 期

页码： 104-108

收录情况： CSCD

摘要： 以P型PRSV-VPg(Papaya Ringspot Virus,VPggene)基因为模板利用高保真酶通过两对引物(突变4个位点),PCR扩增获得一条276bp和一条141bp的两个小片段.以此为基础,利用长引物延伸和套叠PCR的方法,定点突变剩余5个位点,最后拼接获得W型PRSV-VPg基因.结果表明通过上述方案可以成功改造P型PRSV-VPg基因,获得与W型PRSV-VPg同源的目的基因,成功率为100%.该技术可以绕开传统的通过寻找毒源进行RT-PCR方法和人工合成方法获得病毒基因,其技术操作简单,且节约时间和成本,并在人工合成基因、多位点基因定点突变等方面具有很好的借鉴作用和应用价值.

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